Lípidos y membranas biológicas. Detergentes.

1. a. Escriba la estructura de dos triglicéridos, uno de los cuales sea sólido a 37 °C y el otro líquido.

b. Si tiene una preparación de 1-palmitoil-2-estearil-3-miristoilglicerol en benceno impurificada con ácido fosfatídico, ¿cómo podría separar ambas sustancias en forma rápida y sencilla? Escriba la estructura de ambas.

2. Se realiza una electroforesis a pH 7.0 de la siguiente mezcla de lípidos: fosfatidiletanolamina (PE), fosfatidilserina (PS), fosfatidilglicerol (PG), difosfatidilglicerol (DPG) y tripalmitato de glicerilo. Indique hacia que electrodos se dirigen los distintos componentes.

3. Si usted tiene vesículas mixtas de PE y PC (fosfatidilcolina), ¿puede hacer alguna predicción sobre la distribución de los fosfolípidos en la bicapa? ¿cuál será el componente mayoritario de la capa externa? ¿por qué?

4. Escriba la estructura del a -D-galactopiranosil (1® 6)-b -D-galactopiranosilglicérido.

5. La lisolecitina es un detergente, ¿de qué tipo? (iónico o no iónico). Escriba su fórmula desarrollada.

6. ¿Cuáles son los riesgos de usar un detergente iónico en la purificación de proteínas de membranas?

7. Indique como actúa un detergente no iónico y qué ventaja tiene su uso en la purificación de proteínas de membrana.

8. Si usted ha purificado una proteína de membrana y quiere medir su actividad biológica, ¿qué estrategia usaría si, a) se trata de una enzima "asociada" a membrana, y b) se trata de una proteína integral de membrana?

9. Cuándo se purifica una proteína de membrana es común enfrentarse con el problema que la proteína precipita, ¿porqué sucede esto? ¿cómo podría solucionarlo?

10. Durante la caracterización de una proteína de membrana en una fracción de purificación que contiene octilglucósido, se estimó el PM de la proteína en aproximadamente 60.000. Sin embargo, cuando se removió la mayoría del detergente, la proteína eluyó en el volumen muerto de una columna de exclusión con corte 100.000 Da. ¿Qué pueden concluir de estas observaciones?

11. Un extracto con solvente orgánico de un cultivo celular se sometió a análisis de composición química, determinándose la presencia de fosfatidilserina, ácido fosfatídico y esfingomielina (50%, 30% y 20%) respectivamente.

1. Escriba la fórmula química desarrollada de los lípidos hallados.

2. ¿Cómo podría separar éstos tres lípidos entre sí?

3. ¿En qué estado de agregación se encontrarán éstos lípidos en el microorganismo a 30ºC? ¿Por qué?

4. La saponificación de los lípidos produjo una mezcla de los siguientes ácidos grasos: C18:3, C16 y C16:1. Ordénelos de acuerdo a T de fusión creciente. Justifique.

12. A usted le encomiendan diseñar un experimento para determinar la concentración micelar crítica (CMC) del SDS. Para ello cuenta con SDS, agua desionizada y una sustancia X de las denominadas "sondas de membrana". Esta sustancia X presenta la característica de comportarse como una molécula fluorescente (se excita la molécula por absorción de luz a 380 nm y se desexcita emitiendo luz a 420 nm, emisión que se puede medir con un espectrofotómetro) únicamente cuando se encuentra en fase orgánica. No es fluorescente ni presenta ninguna propiedad espectral relevante cuando se encuentra en solución acuosa. La constante de partición de X en fase orgánica respecto de fase acuosa es del orden de 10⁵.

1. ¿Qué es la CMC?
2. ¿Cómo realizaría la determinación de la CMC del SDS?
3. Qué‚ sucederá con la concentración de SDS monomérico en fase acuosa una vez que se supera la CMC, y a medida que se vaya agregando más SDS a la solución?.

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