جمع ونقل البعوض الحي للأختبـــــــــــــارات

 جمــــــــــــع البعوض :

1.   لكي يمكن الحصول علي اعداد كافية من أناث البعوض المتغذية اللازمة للاختبارات يفضل أن يجمع البعوض في الصباح الباكر – ويجمع البعوض بشفطة الفم أو بأنبوبة اختبار .

2.   تجنب جمع اناث البعوض التي تكون في مراحل التغذية الأولي والسادسة والسابعة إذا أن الاختبارات يجب أن تحرى علي اناث في المراحل الثانية والثالثة ولكن ويمكن ايضاً استعمال نصف الحبلي أي التي في المرحلة الرابعة والخامسة من مراحل الهضم .

3.   بقدر الأماكن تجنب جمع بعوض من نوع غير المراد اختباره . إذا أن هذا الحرص أثناء الجمع يوفر الوقت الذي يستنفذ في فرز الأنواع في المعمل قبل الأختبار .

4.  أجمع البعوض علي دفعات لاتزيد كل دفعة عن خمسة بعوضات في الشفاطه أو الانبوبة إذا أن تزاحم عدد أكبر داخل الشفاطة يسبب  وفيات كثيرة به وقد يحتاج الأمراض في بعض الأنواع الرهيفه جمع بعوضة بعوضة .

5.  إذا جمعت بالشفاطة فلا حظ أن يكون الشفاطة خفيفا حتى لا تسبب صدمة للبعوض فتحدث به وفيات ....

6.   توضع كل دفعة تجمع في اكواب ورق معده لاستقبال البعوض بأن يغطى بقطعة تل مثقوبة من الوسط لتسمح بمرور فوهة الشفاطة لادخال البعوض ، وحاذر أن تتفخ شديدا الئلا تحدث صدمة للبعوض اثناء ايداعة بالاكواب ولا يزيد عن 35بعوضة بكـــــــــــل كوب .

7.  حاذر أن تضع الأكواب أثناء جمع البعوض في مكان ملوث بالمبيدات ، وكذلك حاذر أن تضعها معرضة لضؤ الشمس ، واحرص علي وجود قطعة مبلله بالماء فوق التل الذي يغطى كل كوب .

8.  ضع الأكواب في صندوق كرتون وغطها بقطعة قماش مبلله تحت غطاء الصندوق .

البعــــــــــــــــــوض الحـــــــــي :

•   راقب وجود رطوبة كافية بقطع القطن التي تغطى الأكواب بقطعة القماش التي توجد تحت غطاء الصندوق الموضوع به الأكواب ، بللها بقطرات من الماء بواسطة قطارة كلما لا حظت جفافها .

• احمل الصندوق الورق علي راحة يداك حتى تصل إلي مكان الأختبار – وأن كان النقل بيسيـــارة استمر في حملة علي راحة يدك ولاتضعة في أرضية السيارة حتى لا يسبب أهتزازها صدمات للبعوض .

• حاذر من تعرض الصندوق لاشعه الشمـــــــــــس .

حفظ البعوض حتى وقت الاختبــــــــــــــار :

• ضع الصندوق المحتوى أكواب البعوض في مكان غير ملوث بالمبيدات ، معتدل الحرارة بعيدا عن أشعة الشمس .

•  راقب جفاف قطع القطن التي تغطى الأكواب وقطعة القماش الموجودة تحت الغطاء واحفظها رطبة دائما بقطرات الماء بواسطة قطارة .

تشريح إناث البعوض لاستخراج الجهاز التناسلي :

الـــــــــــــهدف :

 تقدير عمر البعوض ما إذا كان حديث الخروج من العذراء ولم يسبق له وضع البيض أم سبق له وضع البيض .

 الأدوات المستعمـــــــــــــلة :

* قفص أو كوب لحفظ البعوض المتغذي لمدة 24 / 48 ســـــــــــــاعة لهضم وجبة الدم في حــــاله التشريح للجهاز التناسلي. * أنبوه لقتل البعــــــــوض  *     مــــــــــاء مقطـــــــــر *     شرائح زجاجية نظيفة *  أغطية للشرائح نظيفة  *  أدوات التشريــــــح: عدد

خطــــــــــــــــوات العمل :

1. تقتل البعوضة بيخار الكلوروفورم أو الزيلول أو البنزين أو بابسط شئ بواسطة دخان السجاير أو بمجرد رحها في أنبوه اختبار .

2. أقطع الأجنحة والأرجل في مواضع قريبة من الجسم ( عند الحرقفة ) مستعملاً الأبرة ذات الطرف المثلث أو بمشرط من مشارط العين .

3. أمسك البعوضة من الملمس بواسطة الملقط واغطسها في كحول 70% ثم ضعها علي شريحة نظيفة موضوع بوسطها قطرة من الماء المقطر – تحت البينوكلار .

4. 4 /      وجه طرفة بطن البعوضة ناحيتك قرب نقطة الماء والرأس إلي الخارج علي ظهرها .

5. أمسك الأبرتين المثلثتين كل أبره في يد ، ثم أقطع جلد البطن عند الحلقة السابعة قطعا سطحياً يشمل الترجمة والأسترنة ، حاذر أن تتعمق الأبره إلي الأحشاء الداخلية .

6.  أسحب مؤخرة البطن بتثبيت أبرة علي الحلقة الثامنة وجذبها نحوك مع تثبيت الصدر بأبره أخرى بيدك اليسرى فتنسحب القناة الهضمية والمبيضين ، وفي الأناث الحبلى يلزم توسيع الجلد عند الحلقة السابعة قليلا مع ضغط جانبي البطن ضغطا خفيفا حتى لا ينقطع المبيضين المملؤين بالبيض عن قناتيهما ، وقد يحتاج الأمر إلي سلخ السترنات عن الترجات سلخا طوليــــــــا .

7. 7أ فصل القناة الهضمية من المستقيم حتى المرئ مع صدر البعوض ورأسها ثم أفصل المبيض بجزء من قناته المشتركة وأنقلها إلي نقطة مـــــاء جديدة علي شريحة نظيفة .

8. أفحص بالمبكروسكوب بعد وضع نقطة مـــاء مقطر علي الجهاز التناسلي قبل الفحص مباشرة وبعد جفافـــــه لزيادة الأيضاح للقصبات الهوائية بالمبيض وبخروج الهواء واحلال الماء محلـــــــــــــة .

9.  التمييز بين الأنثى ألحديثة ( لم يسبق لها وضع البيض ) والأنثى البياضة ( سبق لها وضع البيض ) يكون بواسطة شكل القصبات الهوائية ففي الحالة الأولى تكون نهايتها ملفوفة بشكل عقدة أما في الحالة التي سبق لها وضع البيض فتكون نهايات القصبات الهوائية مفرودة وتظهر بشكل شبكــــــــة .

في حالة الأناث حديثة الخروج من العذراء :

   يكون المبيضان ملتصقان بالجلد بواسطة القصبات الهوائية فاتباع الطريقة السابقة أي سحب مؤخرة البطن يعرضها للانفصال عن باقي الجهاز التناسلي وبقائها ملتصقان بالبطن ، لهذا يستحسن بعد قطع الجلد بين الحلقة السابعة والثامنة أن تحز البلورا وتسلخ استرنات الحلقات السابعة والسادسة .

 تشريح الغــــــدد اللعــابيــــــــــــة :

  يمكن اجراؤة علي البعوض الحي وعلي البعوض الذي تساقط بالفلت أثناء الاستكشاف فور جمعة ، وتوجد جملة طرق لاستخراج الغدد اللعابية التي توجد عاده في مقدم الصدر في موضع إعلا قليلا من موضع اتصال حرقفة الرجل الأولى بالصدر – ونلخص هنا طريقتين وفي كل منها يجب قتل البعوض ونزع ارجلها واجنحتها كالطريقة التي اتبعت في تشريح المعدة ووضعها علي شريحة قرب نقطة ملـــــــح فسولوجي تحت البينوكلار .

 الطريقــــــــة الأولـــــــــــــــــــى :

    يضغط علي الصدر في خلف موضع الغدد اللعابية بقليل ثم جذب الرأس حتى تنفصل من الجسم وتسحب الغدد معها .

1. ضع البعوض بحيث تكون الرأس ناحيتك قرب حافة نقطة الملـــــــــح .

2. أضغط علي البلورا بأبرة مثلثة أو بمشرط عين بحيث يكون الضغط شاملاً لمنطقة تقع خلف الرجل الأولي بقليل فيحدث أنبعاج في الرقبـــــــــة .

3. اجذب في نفس الوقت الرأس بابرة في يدك اليمنى ، نحوك واستمر في الجذب والضغط ببطء وحذر حتى تنفصل الرأس عن الجسم ساحبة الغدد اللعابية من الصدر .

4. خلص الغدد اللعابية من الرأس وانقلها إلي شريحة نظيفة .

5. ضع غطاء شريحة نظيف علي نقطة الملح التي تتوسطها الغدتان ، واهد كل غدة مكونة من ثلاثة فصوص وتتوسط كل فص قناة وتلتقي الثلاث قنوات معا مكونه قناة لعاب واحدة للغدة .

6. أضغط علي غطاء الشريحة حتى تتفجر الغـــــــــدد .

7. افحصها تحت الميكروسكوب بالقوة الكبرى باحثا عن اجسام مغزلية يمكن مشاهدتها تتحرك في بعض الأحيان حركة تموجية بطيـــــــــتئة .

 الطريقـــــــــــــة الثانيـــــــــة :

  قطع الرأس والضغط علي الصدر لاخراج الغدد اللعابية .

1.  ضع البعوضة كما في الطريقة الأولي .

2.  افصل الرأس بمشرط حاد وقرب الجزء الباقي من الرقبة نحو حافة قطرة محلول الملــــــح .

3.  أضغط بابرة مثلثة أو بمشرط عريض علي بلورا الصدر ضغطا متساوي خفيفا . فتبرز من الجزء الباقي من الرقبة الغدد اللعابية مختلطة مع بعض الأنسجة الأخرى . كالياف العضلات مغمورة في سائل الجســـــم .

4.   بالبحث البسيط بالابرة الرفيعة في هذه الكتلة يمكن فصل الغدد اللعابية عن باقي الأنســــــــجة وتنقل قطرة ملح علي شريحة نظيفة ويتبع في فحصها ما جاء في الطريقة الأولي .

 عمـــــل تحضير ثابت مصبوغ من الغــــدد اللعــــــابية :

  بعد فحص الغدد اللعابية بالميكروسكوب يحسن صبغها للتأكيد تماما من وجود – السبورورويت أو عدم وجودها فتتبع الخطوات التاليـــــــــة :

1. ارفع غطاء الشريحة الزجاجية الذي يوجد تحته الغدد اللعابية .

2. ضع نقطة من الصمغ العربي أو كندا بلسم علي ظهر غطاء الشريحة وثبته علي أحد طرفي الشريحة بنقطة من الصمغ أي أن سطحه الذي كان ملامسا للغدة يصبح لا علا .

3. اترك الشريحـــــــــة لتجــــف .

4.  ثبت الغدد اللعابية الموجودة بالشريحة وغطائها المثبت علي طرف الشريحة باضافة بعض قطرات من كحول المثيل وأتركها لمــــــده دقيقتيــــن .

5. اصبغ بصبغة متبعا نس الخطوات التي تجرى في صبغ عينات الدم . واتركها لتجف .

6. افحص الشريحة ميكروسكوبيا ويستحسن استعمال العـــــدسة الزيتية .

7.   تشاهد الاسبوروزويت كأجسام مستطيلة مغزلية ، لون الستوبلازم فيها مائل للزرقة ويتوسطه نواه ذات كروماتين أحمر ، وقد يكون الكروماتين مجزأ إلي أكثر من قطعة واحدة .

8. ضــــع نقطة محلول صمغ عربي علي المكان الذي شاهـــــدت به السبوروزويت بالشريحة وغطـــــها بغطاء شريحة نـــظيف لحفـــظـــها .