MODULO V  UNIDAD 3  CAPITULO 4


CAPITULO 4


MEDIOS PARA CULTIVOS CELULARES Y TISULARES.


La definición de los requisitos químicos necesarios para el crecimiento
de células de vegetales o de animales (insectos, mamíferos, hombre,
etc.) para alto número de repiques in vitro ya es un tema practicamente
terminado. Inclusive existen medios totalmente sintéticos, aunque
no son los más económicos. Para mamíferos se necesitan sales, amino-ácidos,
glucosa, diez vitaminas (biotina, ácido pantoténico, colina, ácido
fólico, inositol, niacinamida, piridoxina, riboflavina, tiamina y
B12. Para vegetales el de White contiene nitrato de calcio,
sulfato y bifosfato de sodio, nitrato , cloruro y yoduro de potasio,
sulfato de magnesio, de manganeso, de cinc y de hierro, ácido bórico,
sacarosa, tiamina, piridoxina, ácido nicotínico, i-inositol, colina
y riboflavina.


Todos los medios de cultivo de tejidos se conservan en frío y algunos
ingredientes se congelan.  Los nombre de los medios que están siendo
empleados es mejor consultarlos en los catálogos de los proveedores
de productos bioquímicos, comenzando por el clásico de Eagle, 1955.


PROTOCOLO Y EQUIPOS


La tripsinación y carga del medio en frascos se esquematiza en la
fig. 2 y en la 3.


Las técnicas alternativas que aumentan la superficie de vidrio disponible
para la fijación de los cultivos se observan en las fig. 4 y 5.


En la fig. 3 se aprecian algunos frascos de Roux, cuya técnica de
repicación aparece en la fig. 6.


EQUIPOS PARA CULTIVOS MASIVOS


Casi todos los cultivos de líneas primarias crecen mejor en las superficies
del vidrio y no en suspensión. Por esos hay técnicas que usan unos
4000 frascos de Roux de 100 mL cada uno y otros que usan frascos mayores,
por ejemplo los de Baxter.


En cambio los equipos para cultivo sumergido se parecen a los usados  para
microorganismos, con una agitación mucho más suave para las células,
acostumbradas a la homeostasis protectora, que para microorganismos,
que tienen que verselas con la intemperie tal cual, sin amortiguación
de sus efectos. El principal problema técnico es el de proveer suficiente
oxígeno disuelto para los cultivos sumergidos de células con escasa
agitación. La estructura de las células vegetales es casi siempre
más resistente a la injuria que la sw las células animales, más protegidas
por la homeostasis.


METODOS DE DIVISION Y TRANSPLANTE DE GENES


Se corta el DNA maduro (no el fragmentado) de una planta X, con enzimas
denominadas endonucleasas de restricción, provistas en centenares
de tipos por los laboratorios fabricantes de material biotecnológico.  En
alguno de esos fragmentos se halla el gen deseado.  Sin saber todavía
cuál es el fragmento útil y cuál no lo es, se lo introduce en algun
DNA desnudo como ser un virus o un plásmido, y ellos en una bacteria
denominada Agrobacterium tumefaciens .  Estas bacterias son casi las
únicas que se pueden incorporar a las raíces de las plantas cotiledóneas
Y, generando en esas raíces tumores donde se propagan. Algunas plantas
Y resultan modificadas con atributos típicos de la planta X, señal
que sus Agrobacterium tumefaciens, todavía vivos, contienen el fragmento
valioso con el gen buscado.  De allí en adelante la técnica busca
replicar indefinidamente los vectores con el gen deseado, para reinfectar
otras plantas Y.  Con ello se logra modificar las plantas con nuevas
propiedades.  Cabe dejar bien claro que la ingeniería genética verde
(la de las plantas) es ardua y difícil, así como los riesgos de andar
llevando genes de un entorno al otro.  Los vectores o gen-taxis que
conducen genes de un lado a otro son actualmente sintéticos, imitando
vectores naturales, con nuevos atributos que no existen en los naturales.  Los
hospederos empleados para que hacia ellos se dirijan los gen-taxis,
tienen que ser desarmables, esto es, tienen que ser mutantes que sucumban
fuera del laboratorio porque se les ha arruinado, intencionalmente,
algun gen sintetizador de alguna biomolécula inexistente fuera del
laboratorio.  Como carece del nutriente, se desarma si llega a escapar.


MODULO V  UNIDAD 3 CAPITULO 4  FINAL


AUTOEVALUACION

 (Página en preparación)

Previo

Siguiente 

>actualización 1998 - 2001


Hosted by www.Geocities.ws