INSTRUCTIVO DE ANÁLISIS
RECUENTO AEROBIOS MESÓFILOS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

ALCANCE 

CAMPO DE APLICACIÓN

REFERENCIAS

Directiva 20.83-05	Productos Pesqueros de Exportación. Métodos Estandarizados de Análisis Microbiológico 

RECUENTO DE GÉRMENES AEROBIOS MESÓFILOS VIABLES EN PLACA
A. Preliminares
	La determinación de los gérmenes aerobios mesófilos viables a través del método del recuento en placa, es utilizado para indicar la carga bacteriana de un producto.
	Es de utilidad en productos fresco-enfriados, congelados, precocidos o alimentos preparados.
Principio base del método.
	El método se basa en incubar en agar de recuento en placa, a 35ºC y durante 48 hrs., volúmenes medidos de diferentes diluciones de la muestra, y contar el número de colonias producidas para determinar el número de gérmenes viables o unidades formadoras de colonias por gramo de muestra.

B. Procedimiento
Preparación de la muestra.
	Asépticamente pesar 10 g. de muestra y diluír en 90 ml. de agua peptonada (A-23).
	Homogenizar la mezcal por trituración en un vaso esterilizado de licuadora a  una velocidad aproximada de 14.000 rpm y en un tiempo medio de 60-90 segundos.
Diluciones.
	Según el número de gérmenes esperado y sobre la base de la solución inicial de 10 g. en 90 ml. (dilución 10-1), preparar diluciones decimales de 10-2, 10-3, 10-4, usando pipetas estériles para cada dilución, tomando 1 ml. de la solución anterior en 9 ml. de agua peptonada (fig. 1), evitando se forme espuma. Mezclar manualmente cada dilución agitándola 25 veces en 7 segundos con movimientos ascendentes y descendentes formando un ángulo de abertura aproximado de 60º entre brazo y antebrazo.

Técnica.

1.	Asépticamente pipetear 1 ml. de cada dilución y sembrar por duplicado en placa Petri previamente identificada. Volver a mezclar la dilución a usar, si ésta ha permanecido más de 3 minutos sin agitar.
2.	Agregar a cadA una de las placas 12-15 ml. de agar de recuento en placa (A-21) previamente fundido a baño maría y enfriado a 44-46ºC. No deberá transcurrir un tiempo mayor de 15 minutos entre la dilución de la muestra y la siembra en placas.
3.	Inmediatamente mezclar la muestra diluida y el agar mediante agitación manual suave (movimientos circulares), durante un lapso igual o superior a un minuto, evitando mojar los bordes de la placa; dejar enfriar sobre una superficie plana y horizontal.
4.	Una vez solidificado el agar, invertir las placas de Petri e incubar a 35ºC por 48 ± 2 hr.
5.	Para realizar el contaje, se escogen las placas que presenten entre 30 y 300 colonias, y se utiliza una caja de recuento de colonias; se pone la placa de Petri abierta con la superficie de vidrio hacia arriba y, si es preciso, se divide en sectores marcando mediante un lápiz graso a lo largo de los diámetros.
6.	El cálculo del vapor promedio del número de unidades formadoras de colonias por gramo de muestra se efectúa multiplicando el número de colonias contadas en cada dilución de las placas seleccionadas (valor C), por el factor de dilución correspondiente (valor D).
7.	La diferencia entre los resultados extremos de la determinación efectuada por duplicado, no deberá exceder del 10% de la media aritmética de los 2 resultados; en caso contrario, debe repetirse el examen.

8.	Obtener el valor del recuento total de gérmenes expresado de la siguiente manera:

N= C x D
donde:	N= Unidades formadoras de colonia por gramo de muestra.
		C= Número de colonias.
		D= Factor de dilución.

ANEXOS

A-21
Agar Recuento en Placa (ARP)
Triptona	5,0 g	
Extracto de Levadura	2,5 g	
Glucosa 	1,0 g	
Agar	15,0 g	
Agua destilada	1 lt	

Disolver los ingredientes en agua y hervir.
Poner en tubos o frascos. Autoclave por 15 minutos a 121ºC. El pH final debe ser 7.0  0.1.

A-23
Agua Peptonada para Dilución:
Peptona	1 g	
Agua destilada	1 lt	

Disolver la peptona en un litro de agua destilada ajustando el pH a 6.8  0.1 y esterilizar en autoclave a 121ºC por 15 a 20 minutos.

RECUENTO AEROBIOS MESÓFILOS
Técnica SERNAPESCA – Directiva 20-83-05

10 g de muestra
90 ml de agua peptonada

Agregar 1 ml de la dilución elegida en Placas Petri

Informar como:
UFC/g= x (prom)  (1/inóculo)  10

Agregar 20 ml de Agar Plate Count
Mezclar con movimientos rotatorios de izquierda a derecha durante 1 minuto
Incubar a 30-35°C por 48 hrs.