人黑色素細胞的培養及驅蟲斑鳩菊藥效成檢測
講員: 王亮
中國科學院新疆分院化學所副教授
摘要：
中草藥驅蟲斑鳩菊是一種野生菊科植物，對肢節型小面積白癜風患者有明顯療效,使患者皮膚增黑。本研究對該植物藥物成份進行了分離提取，並建立了人黑色素細胞體外純化培養檢測模型；以黑色素細胞內酪氨酸脢活性提高，黑色素增多作為指標，觀察了驅蟲斑鳩菊提取成的藥效。為對該植物藥物成份進行濃縮，製成中成藥，並對其作用進行研究，奠定了可靠實驗基礎。
一、 體外檢測模型的建立：用人包皮環割手術後剩餘皮片為材料，消化後以ＤＭＥＭ為基本培養基，添加15％胎牛血清，2ng/ml bFGF，1.25mg/l 霍亂毒素建立起正常人純化的黑色素細胞培養模型。
二、 酪氨酸脢活性的測定：酪氨酸脢是黑色素細胞中色素代謝的關鍵性脢，所有的白癜風皮膚患者共同的特徵是酪氨酸脢活性喪失或被抑制。
- 試管內檢測：試管中以多巴為酪氨酸脢活性底物，同時加入酪氨酸脢和藥物提取成份，37度C水浴孵化後，用紫外分光光度計測試對酪氨酸脢活性影響，將藥物提取成份初選。
- 細胞內檢測：在確定細胞半致死劑量，無毒有效劑量基礎上，以無毒有效劑量的藥物提取成份處理培養的黑色素細胞，數天後收集培養細胞，勻漿併加入多巴，37度C孵化後在紫外分光光度計下定量測定細胞內酪氨酸脢的活性。
三、 黑色素顆粒的檢測：收集藥物成份處理後的細胞應用膠體金－免疫電鏡技術，半定量觀察對細胞內黑色素顆粒的形成、生長、形態和數量的影響。
通過上述研究，我們發現驅蟲斑鳩菊幾種提取純化後的藥物成份具有不同程度地促進酪氨酸脢活性的作用，我們將利用核磁共振等技術，進一步純化和分析有效成份的結構和作用機理。