Localización
celular de la homocitrato sintasa de
Penicillium chrysogenum
Naranjo L.; Bañuelos O.; Casqueiro J.; Gutiérrez S.; Riaño J.; Teves F. y Martín J. F.
Area de Microbiología, Facultad de Biología y Ciencias Ambientales, Universidad de León. 24071, León (España).
Con objeto de determinar la localización celular de la homocitrato sintasa (la primera enzima de la ruta biosintética de lisina y de penicilina) de Penicillium chrysogenum, se construyó un gen híbrido formado por el gen de la homocitrato sintasa (lys1) fusionado al gen que codifica la proteína verde fluorescente (GFP) de la medusa Aequorea victoria. Este gen híbrido se utilizó para transformar cepas interrumpidas en el gen lys1 (mutantes HS-), cepas que se caracterizan por ser auxótrofas de lisina. Los transformantes obtenidos (transformantes LGH) mostraron complementada la auxotrofía de lisina y exhibían niveles de actividad homocitrato sintasa similares a los de la cepa control Wisconsin 54-1255. Este resultado demostraba que la proteína quimérica lys1p-GFP mantenía la misma funcionalidad biológica que la homocitrato sintasa nativa. Igualmente, se comprobó mediante inmunodetección, utilizando anticuerpos frente a la GFP, que la proteína quimérica lys1p-GFP se traduce a una proteína estable (no es hidrolizada) en P. chrysogenum. El análisis mediante microscopía de fluorescencia de los transformantes LGH reveló que la fluorescencia asociada a la proteína GFP se encontraba en el citoplasma de dichos transformantes, demostrando que la homocitrato sintasa de P. chrysogenum se encuentra localizada principalmente en este compartimento celular.
