Los resultados de esta tesis se presentan en forma de
artículos publicados. Los primeros trabajos, que se realizan con el fin de
caracterizar la respuesta inmune del humano y del ratón en contra de la TPmy,
se encuentran en los apéndices 1 y 2, en dónde puede apreciarse que la
respuesta inmune humoral y la celular contra la TPmy es diferente contra cada
región de la molécula, a pesar de haber un gran parecido conformacional entre
ellas. También, se informa que la TPmy induce protección contra la
cisticercosis. El tercer trabajo analiza la respuesta inmune-celular de
individuos con neurocisticercosis y la compara con la de individuos sanos.
Un artículo referido es:
“Human T and B cell epitope mapping of Taenia solium Paramyosin” por José Vázquez-Talavera, Carlos F.
Solís, Edith Medina-Escutia, Zoila Morales López, Jefferson Proaño, Dolores
Correa & Juan Pedro Laclette que se publica en Parasite Immunology (2001), 23:575-579
(Apéndice 1). En dicho artículo se describe la elaboración de cuatro
construcciones plasmídicas para expresar, por medio de técnicas de DNA
recombinante, la TPmy completa, el tercio amino-terminal, el tercio central y
el tercio carboxilo-terminal. La obtención de los fragmentos de la TPmy se
llevó a cabo por la amplificación por PCR de tres regiones diferentes del gen
completo de la TPmy, estas amplificaciones se realizaron empleando
oligonucleótidos sintéticos que permitieron la ligación a un vector de
expresión bacteriano (pRSET). Al ligar los fragmentos del gen a este vector las
proteínas fueron expresadas unidas a un péptido de fusión que contiene una
secuencia de seis histidinas, las cuales facilitaron su posterior purificación
por cromatografía de afinidad (ver Materials and Methods del
Apéndice 1). Posteriormente, se analiza la respuesta inmune de individuos con
neurocisticercosis por medio de la técnica de Western blot. Se encontró que el
reconocimiento de anticuerpos en el suero de pacientes neurocisticercosos es
preferentemente hacia el extremo carboxilo-terminal de la TPmy, mientras que
los mismos anticuerpos reconocieron pobremente al extremo amino-terminal
(Figura 2 del Apéndice 1). Por otro lado, las células de sangre
periférica mostraron un patrón totalmente diferente. Las células de pacientes neurocisticercosos
proliferaron con, prácticamente, la misma frecuencia al ser estimuladas con los
tres fragmentos. En contraste, las células de individuos sanos de la misma zona
endémica proliferaron en mayor frecuencia al ser estimuladas con el extremo amino-terminal
(Tabla 1 del Apéndice 1).
Otro
artículo es: “Characterization and Protective Potential of the Immune Response
to Taenia solium Paramyosin in a Murine Model of Cysticercosis.” por José Vázquez-Talavera, Carlos F. Solís, Luis I.
Terrazas, and Juan P. Laclette, que se publica en Infection and Immunity
(2001), 69:5412-5416 (Apéndice 2). En dicho artículo se emplean las proteínas
recombinantes anteriores (la TPmy completa, la amino-terminal, la central y la
carboxilo-terminal) para inducir protección
en contra del cisticerco de T. crassiceps. Al inmunizar ratones con las
cuatro proteínas recombinantes y retarlos con el cisticerco, se observó que la
TPmy completa indujo protección contra la cisticercosis murina y que, en el
extremo amino-terminal radicó la capacidad protectora (Tabla 1 del
Apéndice 2). Al analizar los sobrenadantes de esplenocitos de ratones que se
inmunizaron con el extremo protector y se estimularon con este mismo fragmento,
para la cuantificación de citocinas, se detectó la liberación de IL-2 e IFN-g de una manera antígeno
específica, pero no de IL-4, es decir, una respuesta inmune tipo Th1 (Tabla 4 del
Apéndice 2). También, se puede observar que los anticuerpos de los ratones
inmunizados con TPmy-completa reconocieron preferentemente al extremo
carboxilo-terminal, mientras que el extremo amino-terminal es pobremente
reconocido (Tabla 2 del Apéndice 2), lo cual es similar a lo encontrado
en humanos. En contraste, los linfocitos T de los mismos ratones proliferaron
principalmente al ser estimulados con el extremo amino-terminal (Tabla 3 del
Apéndice 2). Asimismo, se encontró que el isotipo de anticuerpos generado en
contra de la proteína recombinante amino-terminal es IgG1; no obstante, como se
verá en la Discusión esto ya ha sido publicado.
A través de un trabajo de colaboración con el grupo de la
Dra. D. Correa, que
se publicó en The Journal of Parasitology
(2001), 87:587-590 (Apéndice 3), se decidió estudiar si la respuesta inmune
celular del individuo con neurocisticercosis, es diferente de la respuesta del
individuo sano; en otras palabras, se buscaron evidencias de inmunosupresión en
el individuo con neurocisticercosis. Se investigó la presencia de infecciones
recurrentes que señalen un estado inmunosuprimido. Se analizó la respuesta
celular en casos de neurocisticercosis activa en respuesta a concanavalina A y
a un extracto crudo de cisticercos de Taenia solium. También se estudia
el número de células con los marcadores CD3, CD4 y CD8. Asimismo, se explora la
síntesis de mRNA (RNA mensajero) de IFN-g, IL-2, IL-4 e IL-10 por amplificación con técnicas de PCR
(reacción en cadena de polimerasa). La respuesta celular, los marcadores y las
citocinas se analizaron con el fin de saber si la respuesta inmune celular está
suprimida. Como se puede ver en el Apéndice 3 se encuentra que las
características mencionadas anteriormente (infecciones, respuesta celular,
marcadores, citocinas) de los individuos con neurocisticercosis son similares a
los de los individuos sanos. En conclusión, en ningún caso encontramos
evidencias de inmunosupresión.