Fases de Crecimiento in vitro

FASE I  :  Introducción in vitro, se refiere a los medios utilizados para la inducción inicial de los explantes, estos pueden ser yemas o meristemos u hojas.

FASE II : Micropropagación, el medio en donde las yemas obtenidas son subcultivadas. Medio de multiplicación

FASE III :  Enraizamiento, fase intermedia que algunas plantas necesitan para ser establecidas posteriormente en invernadero.

FASE IV : Aclimatación, requerimientos especiales para aclimatar las plántulas en invernadero.

 HORTENSIA, Hydrangea macrophylla
 

FASE I:   Segmentos de tallo sin hojas. Los tallos se desinfectan en solución NaOCl al 0.5% por 5min, enjuagar por 2 veces con agua destilada estéril y colocar individualmente en tubos de prueba (medio I).Temperatura: 26° C

FASE II:   Los tallos cultivados en el medio I, son subcultivados a intervalos de 4 semanas.

 FASE III: Para el enraizamiento, los brotes de 2-3  cm. son cultivados en medio III, antes remueva las hojas de la base de cada tallo. Las plántulas enraizadas, se enjuagan en solución acuosa de captan.

FASE IV: transplantar en macetas que contengan suelo desinfectado e irrigar bajo el sistema de nebulizacion  y mantener durante los primeros 7 días y con 70% de sombra.

Problemas que se presentan: Las yemas inicialmente aisladas contienen internamente contaminantes, la contaminación es interna dado que aparecen semejantes a un halo en el agar, originando la contaminación por debajo de la plántula. Para eliminar la contaminación microbiana, se colectan pequeños ápices 0.1-0.5  cm. a partir de plántulas y se transfiere en medio fresco que contiene 1mg/L BAP. En el medio que contiene BAP 5mg/L + ANA 0.1mg/L, responde como un excelente inductor y desarrollo de callos. El nivel óptimo de BAP para la máxima producción de los tallos de Hydrangea sin presencia de callos probablemente se encuentra entre 1 y 5 mg/L.

Medio para Hortensia

Componentes                     I; II                  III

Sales MS                           comp.               ½

NaH₂PO₄   mg/L                 170                 _

Inositol       ”                       100                 _

Tiamina      ”                        0.4                 _

ANA           ”                        0.1               0.1

BAP            ”                        1.0                 _

Sucrosa       g/L                     20                 20

Agar            g/L                      7                  7

pH               5.7

  MANZANO, Malus spp, Rosaceae

FASE I: Explante: Piezas de tallos con 1 o 2 nudos extraídas a partir de tallos de plantas en crecimiento activo y vigoroso, que muestren yemas laterales, también yemas en estado semidormantes.

 Tratamiento: Prepare secciones nodales al igual que para Prunus spp (cereza) o yemas semidormantes, remueva las yemas y corte el tallo en la parte superior y otra en la sección basal del tejido. Lavar vigorosamente en agua corriente que contenga tween – 20 al 1% (v/v) por 10 – 20 min., dependiendo de la dureza del tallo, realizar el trabajo dentro de la cámara aséptica o flujo laminar, desinfecte con una solución blanqueador al 1/10-1/5 con 0.1% (v / v) de tween – 20 por 10  a 20 min. Y finalmente enjuague por 3 veces con agua destilada estéril, con frecuente esterilización de instrumentos remueva las hojuelas de la yema y cualquier tejido inútil. Cultive en agar.
Temperatura: 22° - 24  °C.
 

Comentarios: Los manzanos son algo especiales en sus requerimientos que pueden variar de especie a especie, de cultivar a cultivar y aun de clon a clon. Se requiere experimentar para determinar los factores precisos a fin de promover la respuesta óptima. Las variables importantes incluyen:

·        Concentración de sales: 1, ½, ¼.

·        Tipo y concentración de auxinas: IBA, AIA, ANA.

·        Etiolación en la fase II.

 FASE II:   Al preparar para el enraizamiento, etiole los cultivos colocándolos en oscuridad continua  (en cajas de cartón) en el cuarto de crecimiento.

 FASE III:   Después  de 2-3 semanas coloque en luz por 1-2 semanas ara que se verdeen antes del enraizamiento. Se requiere de frío (3-6 semanas a 3  °C antes de la lignificación).

Componentes                I                      II               III

Sales MS                                      ½*                   comp.              ½*

FeSO₄                                           27.80                   _                   27.80

Na EDTA                                     37.30                  _                   37.30

Inositol                                          208                  208                     208

Tiamina                                         2.50                 2.50                   2.50

  BAP                                           _                       1. 0                     _

  IBA                                            _                     0. 1                     0.2

Sucrosa                                         30g                  30g                    30.g

Agar                                                6g                   6g                      6.g

 NARCISO, Narcissus tazetta ,  Amarillidaceae.

 Explante: Bulbos.

 Tratamiento : Remover  las escamas secas de los bulbos, las raíces, así como las dos terceras partes  superior del bulbo, luego se desinfecta aproximadamente de 5 mm de ancho por 10 mm de largo, el cual sirve como explante. Usualmente se pueden preparar de 50 a 60 explante a partir de un solo maduro.

 Temperatura: 18  °C.

 Comentarios con la adición de carbón activado al medio, desaparece el amarronamiento y 1-4 bulbillos  in Vitro, son transferidos directamente al campo, sin un periodo de aclimatación, pero antes debe reunir requisitos: 250-300 de peso de peso fresco (bulbillos  de aproximadamente de 1 cm. de diámetro), 2 hojitas y abundantes sistema radicular.

 Otros cultivadores utilizan, para el estadio I, el siguiente medio: MS + 30 g / L  Sucrosa + 8 g / L agar: MS + 5 g /L carbón activado + 1 ANA + 10 mg /L  BAP. PH=5.7.

Components               I                     I I               I I I

 Sales MS*                           comp                  comp                    1/ 2

 Inositol                                  100                      100                    100

 Ac. Nicotí.                                5                          5                         5

 Piridoxina                                  1                          1                         1

 Tiamina                                   2                            2                         2

 SO4Ad                                160                          160                   160

Cas.Hidrol.                           1000                    1000                   1000

 BAP                                        10                         2                        _

ANA                                          1                      0.05                      _

Sucrosa                                   30g                        30g                    30g

Agar                                         6g                          6g                     6g

Ph=5.7     

  En las  sales  de MS  el KH₂PO₄ es substituido por NaH₂PO₄  300 mg/L