1. เลี้ยงเชื้อแบคทีเรียลงในอาหาร LB 3 มิลลิเมตร เขย่าที่ความเร็ว 250 300
รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 1 คืน
2. เก็บเกี่ยวเซลล์โดยการหมุนเหวี่ยง 10,000 รอบต่อนาทีในหลอดเซ็นตริฟิวจ์ขนาด
1.5 มิลลิเมตร
3. ล้างเซลล์ในบัฟเฟอร์ ( 50 mM EDTA และ 0.15 M NaCl , pH 8.0 ) 1 มิลลิเมตร
4. หมุนเหวี่ยงนาน 1 นาที เทน้ำทิ้ง
5. ละลายตะกอนเซลล์ใน proteinase K ( 150 ไมโครกรัม /มิลลิเมตร ในบัฟเฟอร์
) 600 ไมโครลิตร และ 10 % SDS 60 ไมโครลิตร ผสมให้เข้ากันด้วย vertex
6. บ่มที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียส นาน 15 นาที
7. แยกโปรตีนออกโดยเติมฟีนอล / คลอโรฟอร์ม ( 1 : 1 ) 600 ไมโครลิตร ผสมให้เข้ากันด้วย
vertex หมุนเหวี่ยง 10,000 รอบต่อนาที นาน 5 นาที
8. นำสารละลายในส่วนบนมาแยกโปรตีนซ้ำในขั้นตอน 7 8
9. เติมโซเดียมอะซิเตทเข้มข้น 3 โมลาร์ ปริมาตร 0.1 เท่า และ ไอโซโพรพานอล
ปริมาตร 1 เท่า ผสมให้เข้ากัน
10. ตักดีเอ็นเอออก ล้างด้วยเอธานอล 70 % ปล่อยให้เอธานอลระเหยที่อุณหภูมิห้องแต่อย่าให้แห้งสนิท
11. ย้ายดีเอ็นเอลงในหลอดสะอาด เติมบัฟเฟอร์ TE (10 mM Tris HCI , 1 mM EDTA
pH 8.0 ) 200 ไมโครลิตร ละลายให้เข้ากัน
12. ตรวจสอบดีเอ็นเอโดยวิธีเจลอิเล็กโทรโฟรีซิส
13. ถ่ายภาพดีเอ็นเอที่แยกลงได้ด้วยเครื่อง Gel document
ตรวจสอบปริมาณดีเอนเอด้วยเครื่องวัดการดูดกลืนแสง โดยการผสมดีเอนเอ ๑๐ ไมโครลิตร
ในบัฟเฟอร์ TE ๙๙๐ ไมโครลิตร แล้วนำไปวัดค่าดูดกลืนแสงที่ A๒๖๐ แล้วนำไปคำนวณหาความเข็มข้นของดีเอนเอ
1. เลี้ยงเชื้อแบคทีเรียหนึงคืนที่อุณหภูมิ ๓๗ องศาเซลเซียส เขย่าที่ความเร็ว
๒๕๐ รอบต่อนาที
2. แบ่งเชื้อจำนวน ๑ มิลลิลิตร ใส่หลอดขนาด ๑.๕ มิลิลลิตร
3. นำไปหมุนเหวี่ยงด้วยความเร็ว ๕๐๐๐ รอบต่อนาที นาน ๑ นาที ที่อุณหภูมิห้อง
4. เทสารละลายใส่ส่วนบนทิ้งให้หมด จากนั้นจึงคว่ำหลอดนบกระดาษที่นึ่งฆ่าเชื้อ
นาน ๕ นาที
5. เติมบัฟเฟอร์ TE ๒๕ ไมโครลิตร
6. ละลายตะกอนให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยเครื่องผสมสาร ๒-๓ ลิตร
7. เติมส่วนผสมฟีนอล : คลอโรฟอร์ม (๑:๑) ๒๕ ไมโครลิตร ผสมให้เข้ากันด้วย vertex
นาน ๑๐ นาที
8. หมุนเหวี่ยง ๑๐๐๐๐ รอบต่อนาที
9. ดูดสารละลายใส่ส่วนบนจำนวน ๑๐ ไมโครลิตร มาผสมกับสีติดตาม (loading dye)จำนวน
๒ ไมโครลิตร บนแผ่นพาราฟิล์ม
10. ตรวจสอบดีเอนเอโดยวิธี เจลอิเล็กโทรโฟรีซิล (gel electrophoresis)