Programa
Nacional de Epidemiología Veterinaria CORPOICA-CEISA
Noticias Epidemiológicas. Volumen 2, No. 13.
COMPARACIÓN ENTRE ELISA E INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA PARA LA DETECCION DE ANTICUERPOS
ANTI-Anaplasma marginale EN BOVINOS
Seminario presentado por: Antonio María
Ballesteros Torres, Febrero 1 de 1999.
Fuente: Braz Jr.
C.J.; Passos, L.M.F.; Lima, J.D. & Ribeiro, M.F.B. (1997). Arquivo
Brasileiro du Medicina Veterinária e Zootecnia 49(5), 543-549.
Resumen
Un sistema
inmunoenzimático (ELISA) fue comparado con la prueba de inmunofluorescencia
indirecta (IFAT) para la detección de anticuerpos anti-Anaplasma marginale
en sueros bovinos. Se utilizó un total
de 337 muestras de sueros, siendo 298 de ellas recolectadas de bovinos
importados luego de ser sometidos a un proceso de premunización y 39 muestras
recolectadas de bovinos importados de áreas libres de hemoparásitos. La prueba de ELISA fue más especifica que
IFAT mostrándose como un potencial de utilidad para estudios epidemiológicos de
anaplasmosis. Con los resultados obtenidos se determinó, para ELISA e IFAT
respectivamente, una especificidad del 94.9% y 71.8%, una sensibilidad del 100%
y 100%, un valor predictivo positivo (VPP) de 99.3% y 96.4% y un valor
predictivo negativo (VPN) de 100% y 100%.
Los 298 bovinos fueron importados de Canadá con edades de 10 a 20 meses,
120 días post-inoculación con A. marginale durante un proceso de
premunización, los 39 restantes fueron importados de Austria, zona que es
considerada como libre de A. marginale.
Para el análisis de los resultados se utilizó una Tabla de Contingencia
2x2. La preparación de los antígenos
utilizados para el desarrollo de ELISA fue a partir de sangre parasitada de un
ternero esplenectomizado e inoculado experimentalmente con A. marginale, los
leucocitos fueron descartados por lavados con Solución Buffer Fosfato (PBS) y
luego centrifugados, el sedimento obtenido fue filtrado en columna para la
remover los leucocitos, luego este sedimento fue congelado a -70ºC con igual
volumen de Dimetil Sulfóxido (DMSO) 30% en PBS; posteriormente fue descongelado
con desintegrador ultrasónico, luego se centrifugó y el precipitado obtenido
fue solubilizado con un detergente (TRITON X-100 al 4% en PBS) luego se
centrifugó y el sobrenadante obtenido se utilizo como antígeno. La prueba de IFAT fue realizada conforme
a la técnica descrita por el Instituto Interamericano de Cooperación para la
Agricultura (IICA). Las diluciones para las muestras de sueros fueron
realizadas a partir de 1:40 hasta la obtención de una dilución final; fueron
consideradas positivas las diluciones iguales o superiores a 1:80 presentando
fluorescencia. Los parámetros de
sensibilidad y especificidad, a pesar de representar una prueba de diagnostico
de calidad, no pueden ser tomados como única base de decisión en la escogencia
de una prueba, porque están determinados a partir de situaciones donde la
certeza del diagnostico se refleja en la capacidad de acierto de la
prueba. Como conclusión la prueba de
ELISA fue más especifica que IFAT, siendo indicada para la detección de
anticuerpos anti-A.marginale en sueros bovinos, además de ser una prueba
más rápida y práctica y de tener un gran potencial en estudios epidemiológicos
de anaplasmosis. El Programa Nacional
de Epidemiología Veterinaria (EpiVet) trabaja en la estandarización de
técnicas seroepidemiológicas que permitan el desarrollo de estudios de dinámica
poblacional de hemoparásitos, ya cuenta con la prueba IFAT estandarizada y
existen algunas experiencias con la prueba ELISA. Es importante conocer los
avances de nuestros pares en países de la región, para vislumbrar posibles alianzas
estratégicas y para poder ofrecer nuevas herramientas de diagnóstico
poblacional, para que colegas regionales puedan culminar estudios sobre la
epidemiología de los hemoparásitos en diferentes regiones de nuestro país.