Programa Nacional de Epidemiología Veterinaria. CORPOICA-CEISA.

Noticias Epidemiológicas, Volumen 1, N°. 5

 

PCR. PARA LA DETECCIÓN DE Clostridium botulinum TIPO C. EN MUESTRAS AMBIENTALES Y AVIARES.

 

Seminario Presentado por: José Manuel C. Adárraga, Marzo 16 de 1998.

Fuente: Franciosa G., Fenicia L., Caldiani C. & Aureli P. (1996). Journal of Clinical Microbiology. 34(4), 882-885.

 

Resumen

 

En la naturaleza actualmente se reconocen cepas de Clostridium botulinum que producen al menos siete tipos de toxinas antigénicamente diferentes (A, B, C, D, E, F y G), de las cuales las neurotoxinas C y D, están comprometidas con una enfermedad neuroparalítica que afecta a bovinos y aves en los Estados Unidos, Australia, Sudáfrica y otras regiones del mundo donde se ha reconocido el botulismo como causa de mortalidad de animales domésticos y silvestres. En este trabajo se describe el desarrollo de una prueba de PCR para la detección de Clostridium botulinum tipo C en 18 muestras aviares y ambientales, recolectadas durante un episodio de botulismo aviar ocurrido en el verano de 1994, cerca al Río Estuari, provincia de Scandiano (Reggio Emilia) Italia, en donde el número de aves muertas durante ese periodo fue alto y compatible con la sintomatología que se presenta en botulismo.

 

Los resultados de la PCR, fueron comparados con los obtenidos mediante metodologías convencionales, basadas en el bioensayo con ratones.  Después de comprobar los resultados, éstos indicaron la presencia del microorganismos en 6 muestras, hallándose en una sola de ellas la neurotoxina tipo C en especímenes directos, mientras que en los sembrados en medios selectivos y de enriquecimiento, (agar yema de huevo y caldo carne cocida), se obtuvieron 8 muestras de aves y 3 ambientales positivas para dicha neurotoxina; en este caso se presentó una correlación del 100% entre los resultados obtenidos por PCR y el bioensayo en ratón. (no se obtuvieron productos amplificados con otros Clostridium, limite de detección entre 15 y 15 x 10³ esporas por PCR).

 

La detección del agente causal (C. botulinum) es útil, ya que esto sirve de base en el establecimiento de programas de inmunización de los animales domésticos que vivan en el área de riesgo, de igual forma reduciendo la aparición de episodios de la enfermedad en la fauna silvestre. Es así como durante la investigación de este brote de botulismo aviar, se optó por la aplicación de la técnica de PCR, ya que ésta presentó alta sensibilidad, especificidad y rapidez. La asociación no fue tan alta cuando se utilizaron muestras directamente del medio ambiente y de las aves, debido por una parte a contaminación bacteriana y la otra a que en ocasiones la muestra directa poseía una insuficiente cantidad de toxina para ser positiva en el bioensayo, situación que se superó cuando las muestras fueron cultivadas en caldos selectivos y de enriquecimiento.

 

Las características de las cepas aisladas pudieron ser confirmadas mediante la técnica de PCR, llegándose a considerar ésta técnica una buena alternativa frente a las metodologías convencionales, especialmente en la evaluación de una gran número de muestras sin dejar de ser una prueba altamente confiable. Se destaca la relevancia de estas metodologías con relación a las actividades actuales del Programa Nacional de Epidemiología Veterinaria sobre el tema.