Programa
Nacional de Epidemiología Veterinaria. CORPOICA-CEISA
Noticias
Epidemiológicas, Volumen 1, No. 18
USO
DE UN INMUNOENSAYO LIGADO A ENZIMAS, DOT-ELISA CON CORPUSCULOS INICIALES
DE Anaplasma marginale PARA EL
SERODIAGNOSTICO DE ANAPLASMOSIS EN BOVINOS.
Seminario
presentado por: Clara Garzón Almanza, Julio 6 de 1998.
Fuente: S.
Montenegro-James; A.T. Guillen; S.-J. Ma; P. Tapang; A. Abdel–Gawad; SM. Toro
& M. Ristic. Américan Journal of Veterinary Research, 51(10),
1518-1521 Octubre de 1990.
Resumen
Corpúsculos iniciales
purificados de Anaplasma marginale fueron usados con éxito en un Dot-Elisa para
la detección rápida de anticuerpos contra este organismo. El inmunoensayo usó
solo 25 nanogramos de antígeno colocado sobre discos de nitrocelulosa. El
complejo antígeno- anticuerpo fue detectado por proteína A conjugada a
fosfatasa alcalina y la reacción fue leída visualmente después de la adición de
un substrato cromogénico precipitable. La prueba permitió el proceso de
múltiples sueros, bien sea como prueba tamiz o para la determinación de
títulos, en menos de tres horas y se encontró que fue tan sensible como la
prueba de inmunofluorescencia indirecta.
La evaluación general del Dot-Elisa, usando corpúsculos iniciales
aislados de A. marginale para 580
muestras de suero bovino fue: sensibilidad, 93% ; especificidad, 96% y valor
predictivo, 95%. No se observó reactividad cruzada con sueros positivos a Babesia bovis, B. bigemina, Tripanosoma
vivax bacterias comunes o virus. El Antígeno punteado sobre discos de
nitrocelulosa fue estable cuando se almacenó a -20, 4, o 25 grados C. Comparado
con el test de inmunofluorescencia indirecta, el Dot Elisa es más sencillo,
rápido y permite una interpretación de
resultados más objetiva. Su simplicidad y bajo costo, combinado con su alta
sensibilidad y especificidad indican que esta prueba podría reemplazar ensayos
serológicos corrientes usados para anaplasmosis en el ganado.
Al
microscopio electrónico se ha observado que el A. marginale no es una unidad homogénea sino una agrupación de
corpúsculos llamados corpúsculos iniciales, estas son las unidades
infecciosas que penetran dentro del
eritrocito y se multiplican por fisión binaria, formando un cuerpo de inclusión
de 4 a 8 corpúsculos iniciales. Para obtener el antígeno, se infectaron
terneros esplenectomizados con Anaplasma
marginale Florida, en el pico de parasitemia la sangre fue colectada, los
eritrocitos fueron separados y sonicados para hacer rompimiento celular. Los
corpúsculos iniciales se recuperaron por centrifugación diferencial. Se
cortaron discos de papel de filtro de nitrocelulosa de 6 mm de diámetro y sobre
ellos se colocó el Antígeno. La reacción se realizó en placas de
microtitulación, el bloqueo del antígeno con PBS tween 20 dió óptimos
resultados. El uso de la proteína A proporcionó un aumento de la sensibilidad,
porque ésta tiene gran afinidad por la fracción FC de la inmunoglobulina G.
Como conclusión, el Dot-Elisa
es una prueba sensible, rápida y con grandes posiobilidades de aplicación
dentro de las actividades del programa de Epidemiología Veterinaria de CORPOICA
que buscan validar pruebas serológicas para el diagnóstico poblacional de los
hemoparásitos del ganado en Colombia, porque se pueden analizar mayor cantidad
de animales en menos tiempo; no requiere equipo especializado, es muy útil en
el trópico y realizable a nivel de campo.