Programa
Nacional de Epidemiología Veterinaria. CORPOICA-CEISA
Noticias
Epidemiológicas, Volumen 1, No. 15
DETECCION DE TOXINAS C Y D DE Clostridium botulinum POR UNA TECNICA INMUNOENZIMATICA ELISA.
Seminario
Presentado por: Diana.
Yamile.Rivera.A, Junio 1 de 1998.
Fuente: R.J.Thomas.(1991).
Australian Veterinary Journal, 68(3), 111-113.
RESUMEN
Se
desarrolló una ELISA para detectar toxinas de Clostridium botulinum
usando anticuerpos policlonales de un complejo tóxico- semipurificado de
la neurotoxina. La sensibilidad de la ELISA para detectar toxinas tipo C y D,
comparada con la inoculación en ratón, fue de 70%, demostrando a su vez una
especificidad de 96% en muestras de animales con diagnóstico de botulismo,
basado en signos clínicos e historia del hato. Sin embargo, tanto la
inoculación en ratón como la ELISA dejaron de detectar toxina en muchos
animales con un diagnóstico presuntivo de botulismo. Se observaron algunas
reacciones cruzadas con toxina de C novyi tipoA, pero no con otras especies de
clostridios. Aunque la ELISA descrita no reemplaza la inoculación en
ratones para el diagnóstico de
botulismo, es útil como prueba
adicional. El objetivo de este trabajo fue describir el desarrollo de una ELISA
en sandwich para detectar toxina botulínica C y D. La prueba fue evaluada
usando filtrados de cultivo y material
de campo (recolectado entre 1986 - 1989) de casos donde se presentaron signos
clínicos acordes con botulismo. Las muestras fueron tratadas hasta obtener un
sobrenadante filtrado, la prueba de toxicidad fue llevada a cabo por la
inoculación intraperitoneal en ratones; a las muestras tóxicas se les determinó
la dosis letal 50 (MDL50/ml) por el método de Reed and Muench. Para
detectar toxina botulinica se obtuvo antitoxina IgG de ovino y
antitoxina IgG de conejo, se utilizo un conjugado anti IgG de conejo
marcado con peroxidasa y como substrato OPD; las lecturas fueron llevadas a
cabo en un espectofotómetro a 490nm. La Densidad Optica (DO) corregida del
control positivo fue 1.0; una DO corregida de más de 0.3 fue considerada positiva para toxina
botulinica; DO entre 0.2 - 0.3 sospechoso; DO menor de 0.2 negativo. El punto de corte fue determinado por la DO
corregida de las muestras negativas. Los resultados con los filtrados
de cultivo de C. botulinum fueron
positivos para toxina C y D, todos los otros cultivos de Clostridios, fueron
negativos con DO menores de 0.2, con excepción del cultivo de C.novyi, el cual
presentó una DO por arriba de 0.24. En muestras de campo las toxinas fueron
detectadas por ambas pruebas en 21 muestras, 7 muestras fueron positivas para
inoculación en ratón pero negativas para ELISA, 5 muestras fueron positivas
para ELISA pero negativas para inoculación en ratón y 109 muestras fueron
negativas para ambas pruebas. Mientras que la ELISA descrita no es
suficientemente sensible para reemplazar el bioensayo en ratones para el
Diagnóstico de botulismo en animales, es útil como prueba adicional y puede
detectar toxinas en algunas muestras con insuficiente actividad tóxica para
matar al ratón. Esta prueba también es útil para realizar evaluación de tamiz
de cultivos líquidos, para detectar la
presencia de C botulinum toxigénicos, presentando ventajas como técnica
alternativa relativamente rápida y realizable en corto tiempo.
La
relevancia del artículo radica en que
las métodologias presentadas son muy
utiles para mejorar las actividades
actuales del Programa de Epidemiològia Veterinaria sobre el Desarrollo de
Metodologìas para la detección de agentes causantes de muerte Súbita en
bovinos.