Dilución para conteo de microorganismos viables
Si es muestra líquida congelada fundirla y homogeneizarla. No es recomendable que el producto llene totalmente el recipiente para evitar escurrimientos y contaminación.
Para muestras sólidas se pesan 10 gramos y se diluyen en 90 ml de solución diluyente, se licúa o se puede usar un mortero estéril. Se considera como la primera dilución. Para las diluciones sucesivas se usan pipetas diferentes inoculando simultáneamente a las cajas petri.
El volumen que se transfiera nunca será menor del 10% de la capacidad total de la pipeta, por ejemplo para 0.1 ml no se usa una pipeta de más de 1 ml.
Diluyentes de uso general
Consiste en contar colonias que se desarrollan después de cierto tiempo en el medio de elección presupone que cada colonia proviene de un microorganismo en la muestra.
Reglas para conteo en placaSeleccionar aquellas placas donde aparezcan de 30 a 300 colonias, pues hay menor error en el conteo.
Contar todas las colonias de la placa. Si el número se estima mayor de 300 y no hay diluciones subsecuentes:
301-500 colonias se divide en dos partes y el número de colonias contadas se multiplica por 2.
501-800 colonias se divide en cuatro partes y el número de colonias contadas se multiplica por 4.
>800 colonias se cuentan de 10 a 20 cuadros se promedia y se multiplica por el número de cuadros que ocupa la caja.
El número de colonias contadas deberá ser multiplicada por el inverso de la dilución y considerar si la técnica fue por vertido o por superficie (debido al volumen de la muestra).
Redondear la cifra obtenida en el recuento
de tal forma que haya dos dígitos al inicio de la cifra por ejemplo:
129 se reporta 130
2,417 se reporta 2400
49 se reporta 49
Recuento en tubo
Son técnicas empleadas para el análisis de muestras que supone una concentración de microorganismos pequeña. Es una estimación de la densidad de bacterias en el alimento. Tiene una base estadística que sería la probabilidad de obtener tubos con cultivo positivos va a disminuir conforme es menor el volumen de muestra inoculada.
Permite la inclusión de agentes selectivos y se utiliza cuando se requiere de un medio enriquecido previo a la identificación de un grupo microbiano.
Pruebas presuntivas
Frecuentemente se utiliza como una etapa de enriquecimiento que busca aumentar la concentración de microorganismo de interés.
Se considera positivos aquellos que después de incubados presenten enturbiamiento, cambio de color, formación de gas. Ejemplo para coliformes fermentación de carbohidratos como caldo lactosado.
Pruebas confirmativas
De los tubos positivos de la prueba
presuntiva se inoculan a la prueba confirmativa. El número de tubos
positivos y negativos determinará el Número
Más
Probablemediante
el uso de una tabla en la cual se estima la
concentración de microorganismos en el alimento.
Ejemplo para coliformes caldo lactosa
bilis verde brillante o agar EMB.
