1.  Solvent (Mobile Phase)
      Solvent เป็นตัวแปรที่มีความสำคัญมากในการแยกสารตัวอย่างออกเป็นองค์ประกอบย่อย Solvent ที่ใช้เป็น
      Mobile Phase ใน HPLC ได้แก่ Organic Solvent  รวมทั้ง Aqueous Solution ของเกลือ ชนิดต่าง

      คุณสมบัติที่สำคัญบางประการของ Mobile Phase ที่ใช้ใน HPLC ได้แก่
       1.  ไม่ทำปฏิกิริยากับ Column หรือ  Packing Material ซึ่งจะเป็นให้คุณสมบัติในการแยกสารผิด
       2.  สามารถละลายสารตัวอย่างได้
       3.  ปราศจาก Particulate (ทำให้เกิดการอุดตันใน Column เป็นการเพิ่มความดันในระบบ) และ  Dissolved Gas
      Solventและสารละลายตัวอย่างทุกชนิดก่อนการวิเคราะห์โดยใช้ HPLC  ควรกรองผ่านกระดาษกรองที่มีรูพรุน
      ขนาด 0.45 – 0.5 ไมครอน,Certrifuge เพื่อกำจัดก๊าซซึ่งละลายในสารละลายทั้งหมดซึ่งอาจทำได้โดยใช้
      Ultrasonic Bath
       4.  บริสุทธิ์ปราศจากสิ่งเจือปนซึ่งรวมถึงพวก Preservative และ Stabilizer ต่างๆ สำหรับน้ำกลั่นจะต้องปราศจาก
      สารอินทรีย์และแบคทีเรียต่างๆ
       5. เหมาะสมกับชนิดของ Detector ที่ใช้

     การดูดกลืนแสงของ Mobile phase
       1.  ความบริสุทธิ์ของตัวทำละลายมีความสำคัญต่อการใช้ประโยชน์ของเครื่องตรวจวัด HPLC ที่มี sensitivity สูง
       2.  Oxygen ที่ละลายอยู่ใน mobile phase ทำให้เพิ่ม background ในช่วง UV ต่ำ การไล่อากาศสามารถช่วย
      แก้ปัญหาได้
       3.  เกลือที่เป็นสาร ion-pairing เช่น tetramethylammonium salts (TMA) มักมีสารปนเปื้อนที่ดูดกลืนแสง UV
      จึงควรเลือกชนิดที่มีความบริสุทธิ์สูงเท่าที่จะหาได้

          2.  Pump
          ทำหน้าที่สูบ Mobile Phase เพื่อส่งเข้าสู่ Column  ในอัตราเร็วที่เราเลือก ความดันของระบบจะขึ้นอยู่กับ
      อัตราการเคลื่อนที่ของ Mobile Phase (ถ้าความเร็วสูงจะทำให้เกิดความดันสูง) นอกจากนี้ยังขึ้นอยู่กับ
      Viscosity ของ  Mobile Phase ขนาดของ Packing Material และความยาวของ Column อีกด้วย โดยปกติ
     ความดันที่ใช้มักไม่เกิน  4,000 psi
     Pump สามารถแบ่งออกได้เป็น 2 แบบ
       1. Isocratic pump ใช้อัตราส่วนของ Mobile Phase ได้คงที่ตลอดเวลา
       2. Gradient Pump เป็น pump ที่สามารถควบคุมการเปลี่ยนแปลงอัตราส่วนของ Mobile Phase ได้ตามเวลาที่กำหนด

     การเข้ากันได้ระหว่างตัวทำลำลายและPump (compatibility)
       1.  วัสดุที่สัมผัสกับของเหลวในระบบ HPLC ได้แก่ Stanless steel , โพลิเมอร์ หลีกเลี่ยงการใช้ตัวทำละลายที่สามารถ
      กัดกร่อนโลหะได้แก่ buffer หรือกรดที่มีธาตุ halogen โดยเฉพาะที่ความเข้มข้นเกิน 2M หรือ pH ต่ำกว่า 2
       2.  หลีกเลี่ยงการใช้ตัวทำละลายที่มีธาตุ halogen  อยู่ในโมเลกุลมาก เช่น  Trifluroacetic acid (TFA)
       3..  หลีกเลี่ยงการใช้ตัวทำละลายที่สามารถเกิดกรด HCl เช่น CCl4 , CHCl3
       4.  หลีกเลี่ยงการใช้ cyclohexane เนื่องจากการเกิดการแข็งตัวในปั้มที่อุณหภูมิห้อง
       5.  หลีกเลี่ยงการใช้สารละลาย buffer ที่มี pH มากกว่า 10

          3.  Injector
     เป็นตำแหน่งที่ฉีดสารเข้าสู่ Column มี2 แบบ ได้แก่
       1.  Manual Injector
       2.  Auto samples Injector ที่นิยมใช้มาก

          4.  Column
       1. ตัว Column ทำด้วย Stainless Steel แก้ว หรือ Teflon มีขนาดเล็ก เส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 1- 25 มิลลิเมตร
      ในงานวิเคราะห์ใช้ขนาด 1 – 5 มิลลิเมตร และใช้ขนาดใหญ่กว่านี้กับงาน Preparative Separation และ Steric
     Exclusion Chromatography สำหรับ Analysis Column ซึ่งเป็น Column ที่ใช้ในการแยกสารเพื่อการวิเคราะห์และ
      ควบคุมคุณภาพจะประกอบด้วย
          1.1  Guard Column จะอยู่ก่อน Analysis Column ทำหน้าที่ป้องกันอันตรายซึ่งจะเกิดแก่ Column ช่วยให้ Column
      มีอายุการใช้งานนานขึ้น
          1.2  Precolumn Material  ทำหน้าที่กรอง Particle
       2.  Packing Materrial ที่ใช้ในงานวิเคราะห์มี 2 ชนิด คือ Pellicular Type และ Microparticulate

          5.  Detector
       Dectector ที่นิยมใช้กันมากมี 3 ชนิด
       1.  UV- Detector  สารที่จะวิเคราะห์ต้องสามารถดูดกลืนแสง UV ได้ เมื่อต้องการใช้ UV Detector อาจเตรียม
      derivative ของสารประกอบที่วิเคราะห์เพื่อให้ได้สารซึ่งดูดกลืนคลื่นแสง UV
       2.  RI Detector จะใช้เมื่อต้องการเปรียบเทียบความแตกต่างของ Refractive Index ของสารตัวอย่างและสาร
      Reference
        3.  Fluorescence Detector ใช้ได้กับสารที่เมื่อดูดกลืนคลื่นแสง UV จากแหล่งแสงใน Detector แล้วสามารถเปล่ง
      Fluorescence ได้