• Ápices de cebolla.
• HCl diluido.
• Colorante aceto - orceína.
• Portaobjetos.
• Cubreobjetos.
• Papel toalla (no hay en el laboratorio).
• Aguja de disección.

1. Preparación de la aceto - orceína:

• Añadir 2 g de orceína a 45 ml de ácido acético caliente (80º a 90º C) y agitar rápidamente.
• Añadir gradualmente a esta solución, 55 ml de agua destilada a temperatura ambiente.
• Dejar enfriar.
• Filtrar dos (2) veces.
• Guardar en botella oscura.

• Tomar una cebolla pequeña o mediana y quítele la cáscara con cuidado.
• Raspe cuidadosamente la parte inferior de la cebolla, en donde están las raíces secas, con una navaja afilada.
• Coloque la cebolla sobre un frasco o recipiente pequeño que contenga agua (agua suficiente para tocar la parte inferior en donde brotarán las raíces); no permita que la cebolla caiga dentro del recipiente sino que quede suspendida sobre el agua (si es necesario, inserte unos palillos de dientes en los lados de la cebolla para que la sostengan).
• Espere que aparezcan las raíces en la cebolla (esto puede tardar 3-5 días).
• Corte los últimos 10mm de cada raíz (entre 10:00 a.m. y 12:00 m.d.) y colóquelos en la solución fijadora de tejido llamada Carnoi (dejarlas allí por 24 horas).
• Después de 24 horas de estar en solución Carnoi, transfiera las raíces a alcohol etílico al 70% (allí podrán permanecer por varios meses a temperatura ambiente).

1. Enjuague los ápices de cebolla (fijados) en agua destilada por 30 segundos.
2. Coloque las raíces en un plato Petri que contenga unos 3mL de HCl 1% por 7-8 min. (esto se hace para romper la pared celular).
3. Mientras transcurre el tiempo anterior, corte y conserve la porción del ápice de raíz que posea un tejido blanquecino (casi 2-3 mm del extremo de la raíz) y deseche el resto.
4. Transferir los ápices a agua destilada y dejarlos allí 30 segundos (enjuague).
5. Coloque el tejido sobre un portaobjetos e inmediatamente agregue dos gotas de aceto-orceína sobre éste.
6. Coloque un cubreobjetos sobre el tejido y caliente la muestra suavemente por 1 minuto, por medio de toques intermitentes sobre la superficie de un plato de calentamiento o "hot plate" (durante este tiempo vigile que el tejido permanece humedecido con el colorante, no permita que hierva ni que se seque; agregue más colorante si es necesario). Esta etapa es opcional (el calentamiento intensifica la tinción).
7. Coloque un trozo de papel toalla sobre el cubreobjetos; presione fuerte y cuidadosamente por medio de un borrador de lápiz (esta técnica se llama "extendido por aplastamiento" o "squach" ). Recuerde que mientras esté más aplastado, las células se separarán más unas de las otras y se encontrarán en el mismo plano, distinguiéndose mejor las distintas etapas de mitosis.
8. Después del aplastamiento, si es necesario, levante el cubreobjetos con la ayuda de una aguja de disección y agregue una gota adicional de aceto-orceína; coloque nuevamente el cubreobjetos sobre la muestra.
9. Observe al microscopio (primero con el objetivo 10x localice el área adecuada, luego pase a 40x para observar con detalles).
10. Encuentre las cuatro etapas de la mitosis, además observe la apariencia de las células que se encuentran en interfase (aquellas que no están en mitosis).

• Las características de cada etapa de la mitosis.
• Comparación entre mitosis en células vegetales y animales.
• Diferencia entre citocinesis y cariocinesis.
• Diferencia entre citocinesis en célula vegetal y animal.
• ¿Qué es el fragmoplasto y placa celular?

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