MICROSCOPÍA (I PARTE)
I. GENERALIDADES ACERCA DEL MICROSCOPIO
El ojo humano solo puede discriminar (resolver) dos puntos separados por más de 0,1mm (= 100µm). La mayoría de las células miden menos de ese tamaño y las estructuras celulares son más pequeñas aún; por eso, para el estudio de las células, es necesario usar instrumentos que permitan observarlas de mayor tamaño. Este instrumento es el microscopio.
Los avances logrados en el campo de la microscopía han permitido examinar detalladamente la estructura íntima de las células.
Los microscopios más potentes que se han construido hasta el momento son los microscopios electrónicos; con éstos se puede obtener una información directa de estructuras que oscilan entre 0,4 y 200 nm. Sin embargo, este tipo de microscopio es muy costoso y no se puede tener uno para cada estudiante.
El tipo de microscopio que es usado rutinariamente en el laboratorio de biología es el microscopio óptico.
II. TIPOS DE MICROSCOPIOS
A. El Microscopio Óptico Compuesto.
1. Microscopio de Campo Claro
: En este tipo de microscopio el material debe ser examinado por transparencia, esto significa que la luz debe atravesar la muestra para formar imágenes. Por eso es necesario que el cuerpo que se va a examinar sea de poco espesor ("cortes o láminas delgadas") o transparente, colocado sobre una lámina de vidrio ("portaobjetos"); así, éste puede ser atravesado por la radiación luminosa. Sin embargo, en el caso de las células, la mayoría de sus componentes no pueden ser visualizados directamente porque son transparentes a la región visible del espectro; sus distintos componentes presentan poco contraste. Para contrarrestar esta limitación se emplean colorantes que permitan teñir selectivamente tales componentes. No obstante, las técnicas de coloración tienen el inconveniente de que no se pueden usar, en la mayoría de los casos, en células vivas.
Los microscopios ópticos modernos pueden producir imágenes con un aumento de hasta cerca de 2000 veces (x 2000). En estos microscopios, el aumento está limitado por el poder de resolución que puede lograrse con la luz visible.
INVESTIGAR: otros tipos de microscopios ópticos.
B. El Microscopio Electrónico.
INVESTIGAR
:
¿Cuál principio físico se aplica en su funcionamiento?
¿Cuáles son los dos tipos de microscopios electrónicos?
¿Cómo reconoce la imagen producida por ambos tipos de microscopios electrónicos?
III. LAS PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO
Reconocer las partes ópticas y mecánicas de un microscopio óptico compuesto monocular y binocular.
Reconocer las partes de un microscopio de disección.
Describir el papel que juega cada una de las partes del microscopio.
Partes Ópticas.
Partes Mecánicas.
IV. REGLAS PARA EL USO, CUIDADO Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO
Repasar las reglas de uso, cuidado y mantenimiento del microscopio.
V. REGLAS PARA ENFOCAR Y OBSERVAR UNA MUESTRA (CON DIFERENTES AUMENTOS)
Revisar la técnica para preparar una muestra que será observada.
Revisar las reglas para enfocar y observar una muestra.
VI. PROPIEDADES DE LAS LENTES DE LOS MICROSCOPIOS
Repasarán las propiedades:
- Poder de aumento.
- Poder de Resolución.
- Poder de Penetración.
- Diámetro del campo visual.
Observarán (con objetivo 4x, 10x y 40x):
- Un portaobjetos con una letra pegada (a ó e).
- Un portaobjetos con tres hilos cruzados, de colores diferentes (para entender el poder de resolución y poder de penetración).
- Un portaobjetos con un cuadro de papel milimetrado pegado (de 10mm x 10mm). Para entender como se afecta el diámetro del campo visual a diferentes aumentos.
MICROSCOPÍA (II PARTE)
Objetivos
:
Estimar el diámetro del campo visual de un microscopio, usando los objetivos 4x y 10x, mediante una regla graduada en milímetros.
Medir el diámetro del campo visual de un microscopio, usando los objetivos 4x y 10x, mediante el portaobjetos con escala micrométrica (escala de 0-2000 µm).
Calcular el diámetro del campo visual de un microscopio para un aumento determinado, conociendo el diámetro del campo visual en otro aumento.
Medir cuerpos microscópicos con el ocular micrométrico.
Estimar el tamaño de cuerpos microscópicos, en micras, conociendo el diámetro del campo visual.
Materiales:
Regla graduada en milímetros (cada estudiante).
Portaobjetos con escala micrométrica.
Ocular micrométrico.
Flor, una por mesa de trabajo (para observar granos de polen).
Muestra fija en un portaobjetos.
I.
Medida del diámetro del campo visual del microscopio
Nota
: Todas las medidas se expresarán en micras (= micrones, micrómetros).
Micra
se representa por la abreviatura µm.
A. Mediante una regla graduada en milímetros (Recuerde que 1mm =1000µm)
A través de una regla graduada en milímetros, mida el diámetro del campo visual de su microscopio usando el objetivo 4x.
Coloque su ojo en el ocular del microscopio. Mueva la regla hasta colocar el borde izquierdo de la marca 0 mm en el borde izquierdo del campo visual (en la parte media de la circunferencia que representa al campo visual).
Cuente cuántas marcas de su regla (exceptuando la que está en contacto con el borde del campo) están dentro del campo visual y estime el tamaño del espacio faltante en el extremo derecho del campo. Ejemplo, si hay 3 marcas completas (3mm) y un espacio que corresponde a 3/4 partes de otra, eso indica que el diámetro del campo visual mide ~3750 µm (3mm = 3000µm; 3/4 mm = 750µm; 3000µm + 750µm = 3750µm). Recuerde que esta medida es una estimación, ya que usted no pudo medir el espacio sobrante sino que lo calculó de acuerdo a su habilidad particular.
Intente hacer lo mismo usando el objetivo 10x. ¿Resultó más fácil ó más difícil? ¿Por qué?
B. Mediante un portaobjetos micrométrico:
Coloque el objetivo 4x en la posición de trabajo (si su microscopio no lo tiene, coloque el objetivo 10x).
Coloque el portaobjetos micrométrico sobre la platina del microscopio.
Enfoque con mucho cuidado la escala del portaobjetos (recuerde que el portaobjetos micrométrico es un instrumento de medición muy caro).
Mueva la marca 0mm, del portaobjetos, hacia el borde izquierdo del campo visual del microscopio. Mida el diámetro del campo como si estuviera usando una regla de mucha precisión. Recuerde que aunque la escala está marcando mm usted lo leerá en micras.
|
Medida en mm (escala del portaobjetos) |
Equivalencia en µm |
Tamaño de las marcas (divisiones) |
|
1mm |
1000 µm |
grandes |
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0.1 mm |
100 µm |
medianas |
|
0.01mm |
10 µm |
más pequeñas
|
Use la medida obtenida en el punto anterior (punto 4) para realizar el cálculo del diámetro del campo visual para 40x y 100x.
- Asumiendo que la medida del diámetro del campo, obtenida con el portaobjetos, fue 2800µm con el objetivo 4x, calcule el diámetro del campo visual con el objetivo 40x.
- Recuerde que hay una relación inversamente proporcional entre poder de aumento y diámetro del campo visual (recuerde el portaobjetos con el papel milimetrado observado en el laboratorio anterior).
- Aquí no es válida la aplicación de una regla de tres simple, por causa de la relación inversa que hemos señalado. Entonces se hace un planteamiento de regla de tres inversa.
- Si diámetro 2800µm----------4x
- X
diámetro---------------------40x ________________________________________
esto es lo que corresponde a una regla de tres directa (simple)
- El nuevo planteamiento (para regla de tres inversa) debe colocar los datos del lado izquierdo o derecho (solo uno de los lados) invertidos, o sea el que está arriba pasa abajo y viceversa.
- Si diámetro 2800µm----------40x
- X
diámetro---------------------4x ________________________________________
X= (2800µm
x 4x) / 40x = 280µm
II. MEDIR CUERPOS MICROSCÓPICOS MEDIANTE OCULAR MICROMÉTRICO
.
A. Calibración del ocular micrométrico (la finalidad es determinar que valor en micras tiene cada división del ocular micrométrico).
NOTA: La escala del ocular no representa a ninguna unidad de medida (generalmente se trata de cien divisiones equidistantes).
- Colocar el ocular con la escala micrométrico en el microscopio (hay que retirar el ocular del microscopio y reemplazarlo por el que tiene la escala, esto se hará con la supervisión del profesor).
- Colocar el portaobjetos micrométrico en la platina del microscopio.
- Colocar el objetivo 10x en la posición de trabajo y enfocar la escala del portaobjetos micrométrico.
- Se verán ambas escalas dentro del campo visual. Ajustar ambas escalas, verticalmente, de tal forma que se vea una sobre la otra (las imágenes se verán sobrepuestas) y que coincidan ambas marcas señaladas como 0.
- Se buscará que división del portaobjetos coincide con alguna división del ocular.
- Mediante una regla de tres directa se calcula la medida en micras para una división del ocular. Ese será el valor necesario para medir con el ocular micrométrico.
B. Medir cuerpos microscópicos.
Usar el ocular micrométrico para medir granos de polen usando el objetivo 10x.
Tome un portaobjetos con una muestra proporcionada por el profesor y mida, mediante el ocular micrométrico el tamaño del cuerpo presente en él.