MEIOSIS

Objetivos:

1.     Observar todas las subetapas de Profase I (Leptonema, Cigonema, Paquinema, Diplonema y Diacinesis) en preparaciones frescas de tejidos de testículos de langostas.

2.     Observar todas las etapas de la Meiosis (Primera y Segunda División) en preparaciones frescas de tejidos de testículos de langostas.

 

Materiales:

1.     Testículos de langostas.

2.     Colorante aceto - orceína.

3.     Solución fijadora Carnoi (3 partes de etanol concentrado - 1 parte de ácido acético glacial).

4.     Portaobjetos.

5.     Cubreobjetos.

6.     Papel toalla (no hay en el laboratorio).

7.     Aguja de disección.

 

Preparativos Previos:

1. Preparación de la aceto - orceína:

a.     Añadir 2 g de orceína a 45 ml de ácido acético caliente (80º a 90º C) y agitar rápidamente.

b.     Añadir gradualmente a esta solución, 55 ml de agua destilada a temperatura ambiente.

c.     Dejar enfriar.

d.     Filtrar dos (2) veces.

d.     Guardar en botella oscura.

 

2. Obtención de testículos de langostas:

a.     Ver la muestra conservada de langosta macho que está en el laboratorio (para que conozca la especie que vamos a utilizar y pueda reconocer el sexo de los individuos que colectará).

b.     Tome una langosta macho y diséquela para extraerle el par de testículos (siga las indicaciones del profesor de laboratorio).  Si no va a utilizar este material inmediatamente, consérvelos por 24 horas en solución Carnoi (solución fijadora de tejidos) y luego transfiera a etanol 70% (en este último puede mantener almacenado a temperatura ambiente por varios meses).

 

Procedimiento:

1.     Enjuague los testículos (fijados) de langosta en agua destilada por 30 segundos.

2.     Corte cada testículo por la mitad (a lo largo del eje mayor) y transfiéralo a un plato Petri que contenga aceto-orceína (el tejido debe quedar sumergido en este tinte por 8 minutos).

3.     Agregue una gota de aceto-orceína en un portaobjetos y coloque sobre ella una pequeña porción del área del centro del testículo (en esta región el tejido parece como filamentoso, tome sólo 2 ó 3 de estos pequeños "filamentos").

4.     Coloque un cubreobjetos sobre el tejido (y coloque un trozo de papel toalla sobre el cubreobjetos); presione fuerte y cuidadosamente por medio de un borrador de lápiz (esta técnica se llama "extendido por aplastamiento" o "squach" ). Recuerde que lo ideal es que el tejido quede muy aplastado; así las células se encontrarán dispersas en el mismo plano, y esto favorecerá el reconocimiento de las distintas etapas de meiosis .

5.     Si es necesario, levante el cubreobjetos con la ayuda de una aguja de disección y agregue una gota adicional de aceto-orceína; coloque nuevamente el cubreobjetos sobre la muestra.

6.     Observe mediante el microscopio (localice el área adecuada mediante el objetivo 10x; luego, cambie al objetivo 40x para observar con detalles).

7.     Utilice los esquemas de meiosis que proporcionará el profesor de laboratorio y reconozca las cuatro etapas de la I división meiótica (incluyendo las 5 subetapas de la profase I) y las etapas de la II división meiótica.  Además, observe la apariencia de las células que se encuentran en interfase (aquellas que no están en meiosis).

 

Libros Para Consultar:

·        Avers, Charlotte. Biología Celular.

·        De Robertis & De Robertis. Biología Celular y Molecular.

·        Karp, Gerald. Biología Celular y Molecular.